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【摘要】:
mRNA前体的剪接是真核生物中基因表达的关键步骤。剪接异常会引起基因表达量异常、蛋白质功能改变,是疾病发生的常见原因。 minigene技术是一项针对突变位点进行体外生物学验证的技术。通过克隆带有变异位点(包括剪切位点附近以及深度内含子中的点突变、插入及缺失等变异类型)的目标基因组片段,构建重组表达载体,转染细胞株,RNA抽取及cDNA反转,再利用电泳和测序技术验证该突变对mRNA剪接的影响(外显
一、minigene技术概述:

  mRNA前体的正确剪接是真核生物基因表达的关键步骤,其剪接异常将会影响基因表达量或功能的异常。minigene技术又称为mRNA异常剪接体外验证实验,是一项针对突变位点是否影响mRNA剪接的细胞水平验证实验。通过克隆带有变异位点(包括剪切位点附近以及深度内含子中的点突变、插入及缺失等变异类型)的目标基因组片段,构建重组表达载体,转染细胞株,RNA抽提及cDNA反转,再利用电泳和测序技术验证该突变对mRNA剪接的影响(外显子缺失、内含子滞留)

 

二、项目优势及服务特点:

  由于该实验确实存在阴性结果的可能,即突变虽然位于剪切区域,但确实没有影响该位点的剪切。因此我们(1)首先会根据突变所在位置,结合生物信息学的方法,帮助客户预测得到阳性结果(即突变会影响剪切)的可能性,并设计整套优化实验方案;(2)随后会根据客户需求、疾病特点等因素,选取两种(及以上)不同的真核表达载体以及两种(及以上)不同组织来源的细胞系进行mRNA剪接验证,从而最大程度的保证获得阳性结果的可能。

 

三、minigene技术服务流程:

1. 针对基因结构特点和突变所在位置,进行生物信息学分析

2. 收到DNA样品后,钓取目的基因及重组表达载体构建

3.  细胞转染

4. RNA抽提及转录分析

 

四、样品寄送要求:

  客户需提供突变检测报告及纯度质量合格的突变位点携带者(纯和、杂合均可)及正常人的基因组DNA,随冰袋一起寄送。

 

五、服务报告:

内容包括:生物信息学预测结果,minigene构建策略示意图,重组载体酶切及测序结果,minigene剪接结果跑胶图及测序结果。

 

六、实验周期及收费:

  实验周期从收到DNA样本开始计算,一般在5-8周左右。收费根据待检测minigene外显子和内含子的序列长度以及突变所在位置、载体数量和细胞种类数量等因素均有差异,具体价格请详询。

 

七、劲爆活动:

  2018-8-8到2018-9-30止,凡签订订单客户均可享受单个价格11800.00元,两个及以上价格8.5折优惠活动联系方式:15391532349。